10x单细胞免疫组库测序
10x单细胞免疫组库测序技术是基于微流控芯片制备单细胞体系，再选择5’端接头的通用引物和免疫分子恒定区的巢式引物进行T细胞和B细胞的V(D)J富集，从而实现成对的重链和轻链（B细胞）或α和β链（T细胞）的V(D)J全长测序和单细胞转录组测序。通过比对、拼接、筛选、注释等构建免疫组库，分析得到TCR/BCR多样性序列，进而获得机体的免疫特征。该技术广泛应用于肿瘤免疫、感染与疫苗、自身免疫疾病以及基础免疫学等领域
技术原理
- 细胞分离与捕获：通过微流控芯片将单个细胞与带有独特条形码（Barcode）、UMI和专门VDJ测序设计的switch oligo凝胶微珠（Gel Bead）共同封装在油滴中，实现单细胞分离
- 靶向扩增：使用VDJ特异性引物扩增BCR/TCR的可变区
- 文库构建：打破油滴，分成VDJ文库与5端mRNA文库
- 高通量测序：使用测序平台进行测序，获取每个细胞的基因表达数据和VDJ序列
- 数据分析：比对、拼接、筛选与注释等操作构建免疫组库并对TCR/BCR进行克隆分型，将同一细胞的基因表达进行匹配
技术优势
- 高通量单细胞分辨率：可同时捕获数千个单细胞的VDJ序列，精确解析每个T或B细胞的抗原受体序列，揭示免疫细胞的克隆多样性
- 多组学联合分析：支持VDJ与基因表达或表面蛋白的同步检测，直接关联抗原受体序列与细胞状态
- 广泛应用：适用于肿瘤和感染免疫等领域研究
应用方向
- 免疫组库解析与克隆多样性研究：适应性免疫图谱构建、自身免疫病与感染免疫
- 肿瘤免疫微环境与免疫治疗：肿瘤浸润淋巴细胞分析、免疫治疗监测
- 感染与疫苗开发：病原体特异性抗体发现
- 血液病与移植免疫：白血病/淋巴瘤克隆演化、药物靶点，推动个性化治疗方案
- 自身免疫与过敏性疾病：致病性自身抗体溯源、过敏原特异性分析
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